脂质体作为药物递送载体的研究中,荧光标记技术是追踪其行为的关键手段。DOPE-TAMRA 作为一种荧光标记磷脂,因 TAMRA 的稳定荧光特性和 DOPE 的膜融合能力,被用于脂质体的可视化研究。本文采用薄膜分散法制备 DOPE-TAMRA 标记脂质体,并系统考察其体外稳定性。
图为:DOPE-TAMRA结构式
制备过程中,按比例称取大豆卵磷脂、胆固醇及 DOPE-TAMRA(摩尔比 7:2:1),溶于三氯甲烷-甲醇混合溶剂中,在旋转蒸发仪上减压蒸发形成均匀脂质薄膜。加入 PBS 缓冲液(pH 7.4)水化薄膜,磁力搅拌 1 小时后,经探头超声处理 5 分钟(功率 300W,工作 3 秒停 2 秒),过 0.22μm 滤膜整粒,获得粒径均一的荧光标记脂质体。动态光散射仪检测显示,脂质体平均粒径为 125.6±8.3nm,多分散指数(PDI)0.18±0.03,Zeta 电位-28.5±2.1mV,表明体系稳定。荧光分光光度计测得包封率为 92.3%,荧光强度均一,满足追踪需求。
图为:DOPE结构式
体外稳定性考察从三个维度进行:一是 4℃储存稳定性,分别于 0、7、14、21 天取样,粒径变化≤10%,PDI 无明显升高,荧光强度保留率 > 85%;二是血清稳定性,将脂质体与 10% 胎牛血清孵育,37℃下 24 小时内粒径增幅 < 15%,无明显聚集;三是 pH 耐受性,在 pH 5.0-7.4 范围内,脂质体结构稳定,荧光信号未出现淬灭。结果表明,该方法制备的 DOPE-TAMRA 标记脂质体具有良好的物理稳定性和荧光稳定性,可满足体外细胞实验及初步体内追踪研究的需求。
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