5-TAMRA-NHS（5-Carboxytetramethylrhodamine-N-hydroxysuccinimide ester）是一种结合了荧光染料四甲基罗丹明（TAMRA）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯的化合物，应用于生物分子标记、荧光探针构建及高通量检测等领域。其核心优势在于通过NHS酯的高反应活性，实现与生物分子（如蛋白质、抗体、核酸）的快速、特异性共价结合，同时保留TAMRA的良好荧光性能。

一. pH 对 NHS 酯基团稳定性的影响（核心活性基团）

NHS 酯基团（-O-NHS）是 5-TAMRA-NHS 与氨基反应的关键活性位点，但其化学稳定性较差，易在水相体系中发生水解反应（生成无活性的 5-TAMRA 羧酸和 NHS），水解速率随 pH 升高而明显加快，具体表现为：

1 强酸性条件（pH < 4）：

NHS 酯水解速率极慢，稳定性较高。此时 5-TAMRA-NHS 几乎不水解，可在酸性溶液中短期储存（如 1-2 小时），但需注意：酸性过强可能略微影响荧光强度（TAMRA 荧光在 pH < 4 时略有淬灭，但不明显）。

适用场景：仅用于预溶解或短期保存，不适合与氨基反应（氨基在此条件下质子化，反应活性低）。

2 弱酸性至中性条件（pH 4-6.5）：

NHS 酯水解速率较慢，稳定性中等。在 pH 5.0-6.0 时，水解半衰期约为数小时（如 2-6 小时，具体取决于温度和浓度），可满足多数标记反应的时间需求（通常反应时间为 30 分钟至 2 小时）。

适用场景：适合对 pH 敏感的生物分子（如某些酶）标记，需控制反应时间，避免水解产物积累。

3 中性至弱碱性条件（pH 7.0-8.5）：

这是 5-TAMRA-NHS 与氨基反应的最佳 pH 范围（氨基在此条件下呈游离态，反应活性高），但 NHS 酯水解速率明显加快：

pH 7.0 时，水解半衰期约为1-2 小时；

pH 8.0 时，水解半衰期缩短至30-60 分钟；

pH 8.5 时，半衰期进一步缩短至15-30 分钟。

此时需权衡 “反应效率” 与 “水解损耗”，通常通过提高探针浓度（过量 5-10 倍）或缩短反应时间（30 分钟内）减少水解影响。

4 强碱性条件（pH > 9.0）：

NHS 酯水解速率极快，半衰期仅数分钟，几乎完全失去与氨基反应的能力，且可能导致 TAMRA 荧光基团的结构破坏（荧光强度明显下降）。

适用场景：完全不适合反应或储存，需严格避免。

二. pH 对荧光性能的稳定性影响（TAMRA 基团）

TAMRA 荧光基团的化学结构相对稳定，其荧光强度受 pH 影响较小，但极端 pH 可能导致轻微变化：

pH 4-8：荧光强度稳定，发射波长（~580 nm）和量子产率（~0.7）基本不变，是荧光检测的最佳范围。

pH < 4：荧光强度略有下降（约 10-20%），可能因质子化导致共轭体系轻微破坏，但仍可检测。

pH > 8.5：在强碱性条件下，TAMRA 可能发生去质子化或结构降解，荧光强度随 pH 升高而逐渐淬灭（尤其 pH > 10 时，荧光几乎完全消失）。

三. 实际应用中的稳定性控制建议

反应体系：优先选择 pH 7.2-8.0 的缓冲液（如 PBS、HEPES），并现配现用，避免长时间放置。

溶解与储存：用无水 DMSO/DMF 溶解（完全避免水分），分装后-20℃避光冻存，使用时快速取出并立即加入反应体系。

水解产物影响：水解生成的 5-TAMRA（羧酸形式）无反应活性，但仍保留荧光，可能干扰标记产物的纯化（需通过透析或层析去除）。

名称：5-TAMRA-NHS

Cas：150810-69-8

分子式：C29H25N3O7

产品规格：mg/g

纯度：95%+

保存方式：-20℃以下，避光，防潮

保质期限：12个月

用途：科研
温馨提示：仅用于科研,不能用于人体

图：5-TAMRA-NHS