产品介绍:
RB-HRP 是一种将罗丹明 B(RB)荧光探针与辣根过氧化物酶(HRP)通过化学偶联形成的多功能生物共轭物。HRP 是一种常用的过氧化物酶,具有催化效率高、稳定性好的特点,能催化过氧化氢参与的氧化反应,常用于immunity检测、生物传感等领域。罗丹明 B 作为荧光标记物,具有荧光量子产率高、发射波长位于橙红色区域(约 580-600nm)、光稳定性较好等优势,可通过荧光成像技术对 HRP 的分布和活性进行追踪。
制备方法:
RB-HRP 的制备通常采用化学偶联法,主要步骤如下:首先对罗丹明 B 进行活化处理,罗丹明 B 分子中含有羧基或氨基等活性基团,可通过活化试剂(如碳二亚胺 EDC、N-羟基琥珀酰亚胺 NHS)将其活化,形成具有高反应活性的中间体,便于与 HRP 发生偶联反应。活化过程需在适当的溶剂(如二甲基甲酰胺 DMF)中进行,控制反应温度在室温左右,反应时间根据活化试剂的种类和浓度调整,通常为 1-2 小时。
随后,将活化后的罗丹明 B 与 HRP 在缓冲溶液(如 PBS,pH 7.2-7.4)中混合,HRP 分子表面含有多个氨基和羧基等官能团,活化后的罗丹明 B 可与 HRP 的氨基发生酰胺化反应,形成稳定的共价键。偶联反应需控制反应物比例,通常罗丹明 B 与 HRP 的摩尔比为 5:1-10:1,反应温度为 4℃,避免高温导致酶活性丧失,反应时间为 12-24 小时,期间缓慢搅拌以保证反应充分。
反应结束后,采用透析法或凝胶过滤层析法进行纯化,去除未反应的游离罗丹明 B 和活化试剂。透析时选用合适截留分子量的透析膜,在缓冲溶液中透析多次,直至透析外液无荧光信号;凝胶过滤层析可使用葡聚糖凝胶柱,通过洗脱分离得到纯化的 RB-HRP 共轭物。最后对纯化后的产品进行酶活性测定和荧光性能检测,确保其同时具备良好的酶活性和荧光特性,合格后分装储存。
中文名:罗丹明B-辣根过氧化物酶(荧光标记物)
英文名:Rhodamine B-Horseradish Peroxidase(RB-HRP)
别称:罗丹明标记辣根过氧化物酶、RB-辣根过氧化物酶偶联物
外观:深棕红色粉末或固体
溶解度:DMSO、DMF
纯度:95%+
保存方式:-20℃,避光,防潮
保质期限:12个月
用途:科研
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体
图片:罗丹明B
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