Acrylamide-PEG-N3进行生物分子的特异性标记的方法
瑞禧生物2025-08-15   作者:ws   来源:
字号大小:

产品介绍:

Acrylamide-PEG-N₃(丙烯酰胺-聚乙二醇-叠氮) 是一种结合了丙烯酰胺的聚合能力、聚乙二醇(PEG)的生物相容性和叠氮基团(N₃)的高反应活性的化合物。

它在生物医学、材料科学及纳米技术领域展现出应用价值,尤其在生物正交化学、点击反应以及功能化材料制备中表现突出。

 

一、标记原理

Acrylamide-PEG-N3 的标记功能依赖两个关键基团的协同作用:

丙烯酰胺基团(碳碳双键):通过自由基聚合或迈克尔加成反应,可将 PEG 链共价连接到含双键或亲核位点(如巯基、氨基)的生物分子或载体上,实现 PEG 化修饰。

叠氮基团(-N₃):通过点击化学(如铜催化叠氮-炔烃环加成反应 CuAAC 或无铜的 SPAAC),与含炔基(-CC-)的探针分子(如荧光染料、生物素、药物)特异性偶联,形成稳定的三唑环,实现二次功能化标记。

 

二、具体操作步骤

步骤 1:生物分子的 PEG 化修饰(丙烯酰胺基团的反应)

目标:将 Acrylamide-PEG-N3 通过丙烯酰胺基团连接到待标记的生物分子(如蛋白质、多肽、核酸)上,引入 PEG 链和叠氮位点。

适用场景:生物分子含可反应位点(如蛋白质的巯基-SH、氨基-NH₂,或人工修饰的双键)。

反应类型:

自由基聚合:若生物分子含双键(如通过基因工程引入的乙烯基标签),可在自由基引发剂(如过硫酸铵、AIBN)或紫外光引发下,与 Acrylamide-PEG-N3 的双键发生共聚,形成共价连接。

条件:缓冲液 pH 7-8,室温反应 30 分钟-2 小时,Acrylamide-PEG-N3 过量 5-10 倍(摩尔比)。

迈克尔加成:丙烯酰胺的双键可与巯基(-SH)在中性 pH 下发生亲核加成反应(无需催化剂),适合含游离巯基的蛋白质(如抗体的链间二硫键还原后产生的-SH)。

条件:PBS 缓冲液(pH 7.2-7.4),室温反应 1-4 小时,Acrylamide-PEG-N3 与巯基摩尔比 10:1

纯化:通过超滤(选择合适截留分子量的膜)或尺寸排阻色谱(SEC)去除未反应的 Acrylamide-PEG-N3,得到 “生物分子-PEG-N3” 中间体。

 

步骤 2:叠氮基团的点击化学标记(引入功能探针)

目标:利用叠氮与炔基的特异性反应,将荧光染料、生物素等探针连接到 “生物分子-PEG-N3” 上,实现可视化或功能化。

反应类型选择:

CuAAC(铜催化):

适用场景:体外标记(非活体),需高效反应。

试剂:含炔基的探针(如炔基-荧光素、炔基-生物素)、Cu (I) 催化剂(如硫酸铜 + 抗坏血酸钠还原生成)、配体(如 TBTA,稳定 Cu (I))。

条件:PBS 缓冲液(pH 7.0-8.0),Cu²⁺浓度 50-100 μM,抗坏血酸钠过量 5 倍,室温反应 30 分钟-2 小时。

SPAAC(无铜点击化学):

适用场景:活体标记或对铜离子敏感的体系(如细胞内标记),避免金属Poison 性。

试剂:含环炔基的探针(如 DBCO-荧光染料、BCN-生物素)。

条件:PBS 缓冲液(pH 7.2-7.4),室温反应 1-4 小时,环炔探针与叠氮摩尔比 2:1

纯化:再次通过超滤或 SEC 去除游离探针,得到最终的 “生物分子-PEG-探针” 标记产物。

 

名称:Acrylamide-PEG-N3

产品规格:mg/g

纯度:95%+

保存方式:-20℃以下,避光,防潮

保质期限:12个月

用途:科研
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体

图:Acrylamide-PEG-N3

Acrylamide-PEG-N3