6-FAM（6 - 羧基荧光素）是一种常用的荧光标记物，化学式为C21H12O7，将其标记在神经递质上，有助于深入研究神经递质在突触传递中的作用。6-FAM具有很强的荧光发射能力，最大发射波长通常处于 518 - 520nm 左右，在蓝光（约 490nm 激发光）激发下，可发出明亮的黄绿色荧光，荧光量子效率较高，能产生清晰且易于检测的荧光信号。以下是具体介绍：

图：6-FAM结构式

一、标记方法及优势

1. 标记方法：通常利用 6-FAM 的羧基与神经递质分子上的氨基等活性基团，在适当的化学反应条件下，通过酰胺化等反应形成稳定的共价键，从而实现对神经递质的标记。

2. 标记优势：6-FAM 具有良好的荧光特性，如较强的荧光强度和合适的发射波长，能够在不明显影响神经递质化学性质和生物活性的前提下，为神经递质提供可被准确检测和追踪的荧光信号，从而实时、动态地观察神经递质在突触传递过程中的行为。

二、在突触传递中的作用

1. 观察释放过程

释放位点可视化：通过 6-FAM 的荧光信号，可以清晰地确定神经递质在突触前膜的释放位点。研究发现，神经递质并非均匀地从突触前膜释放，而是集中在特定的活性区域，这些区域被称为突触小泡释放位点。

释放时间准确测量：结合高速荧光成像技术，能够准确测量神经递质从突触前膜释放的时间进程。例如，在神经元受到刺激后，可观察到 6-FAM 标记的神经递质在几毫秒内迅速从突触小泡中释放到突触间隙。

2. 追踪扩散路径

突触间隙内扩散监测：在突触间隙中，6-FAM 标记的神经递质的荧光信号可以帮助研究人员了解其扩散的方向和范围。神经递质从释放位点向周围扩散，其扩散路径并非随机，而是受到突触间隙内的物理和化学环境的影响，如离子浓度、电场等。

与受体结合位置确定：通过观察荧光信号的最终分布，可以确定神经递质与突触后膜上受体的结合位置。这有助于揭示突触传递的准确性和特异性，即特定的神经递质如何与特定位置的受体结合，从而引发特定的生理反应。

3. 研究作用时效

作用起始时间判断：当 6-FAM 标记的神经递质与突触后膜受体结合后，会引发一系列的生理变化，通过检测相关的荧光变化或生理指标，可以判断神经递质作用的起始时间。一般来说，从神经递质释放到产生生理效应的时间间隔非常短，通常在几十毫秒内。

作用持续时间分析：随着时间的推移，观察 6-FAM 标记的神经递质在突触间隙中的荧光强度变化以及突触后膜上的反应，可以分析神经递质作用的持续时间。神经递质的作用持续时间因递质种类和突触类型而异，例如乙酰胆碱在某些突触中的作用持续时间可能只有几毫秒，而一些神经肽类递质的作用可能持续数秒甚至更长时间。

4. 探索回收机制

回收位点定位：6-FAM 标记可以帮助确定神经递质在突触前膜的回收位点。研究发现，在突触前膜存在特定的转运蛋白，负责将释放到突触间隙中的神经递质重新摄取回突触前神经元，这些回收位点通常与释放位点不同。

回收效率评估：通过比较不同时间点突触间隙中标记神经递质的荧光强度，可以评估神经递质的回收效率。回收效率受到多种因素的影响，如转运蛋白的数量和活性、细胞内的能量状态等。