①查阅资料,查到荧光染料的激发波长,若查不到就根据经验预估激发波长,测定发射光谱;
②若荧光光谱的信号很弱或噪音很大,依据第①步测得的荧光峰位置,测得荧光染料的激发光谱;
③根据②的激发光谱得到最佳激发波长,在最佳激发波长下重新测定发射光谱。
荧光光谱仪或多功能酶标仪:既可以固定激发波长测荧光发射光谱,也可以反过来,固定发射波长测定荧光染料的激发光谱。
如果测定的荧光光谱信号较差的原因:
①样品浓度过高,发生荧光自淬灭;
②激发波长不是最佳,应按左栏步骤进行。
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