氯膦酸盐脂质体（Clodronate Liposomes）是一种巨噬细胞清除工具，在生物医学研究中具有重要应用，巨噬细胞清除脂质体的核心成分为氯膦酸盐（Clodronate），化学名为二氯亚甲基二膦酸二钠。脂质体主要由磷脂和胆固醇构成，磷脂如卵磷脂与胆固醇组合可形成韧性和稳定性良好的脂质体，胆固醇能增强脂质体抗溶解力并提高其透过细胞壁的能力。

氯膦酸盐脂质体制备方法：

薄膜水化-超声分散法（传统工艺升级版）

步骤1：成膜：将磷脂（20 mg/mL）、胆固醇（8 mg/mL）及辅助成分溶于氯仿-甲醇混合溶剂（2:1, v/v），旋转蒸发形成均匀脂质薄膜（转速120 rpm，45℃），残留溶剂<50 ppm。

步骤2：水化：加入含氯膦酸盐二钠盐（100 mM）的硫酸铵溶液（pH 5.0），60℃水化30分钟，形成多层囊泡（MLV），平均粒径2-5 μm。

步骤3：超声破碎：采用探头式超声仪（20 kHz，50%振幅）冰浴处理10分钟（脉冲模式：开3秒/关3秒），将MLV转化为单层小单室脂质体（SUV），粒径降至100±15 nm（PDI=0.12）。

高压均质-挤出法（规模化生产优选）

初乳制备：将水化后的粗分散液通过高压均质机（10,000 psi）循环5次，形成粒径<200 nm的预均质液。

膜挤出：依次通过孔径400 nm、200 nm、100 nm的聚碳酸酯膜（各11次），最终获得粒径均一（95±8 nm）、PDI<0.1的脂质体，产率>85%。

后处理与纯化

透析除杂：将脂质体悬液装入截留分子量30 kDa的透析袋，在pH 7.4的PBS中透析12小时，去除未包封药物与游离离子，包封率从65%提升至92%。

无菌过滤：采用0.22 μm聚醚砜（PES）滤膜过滤除菌，内Poison 素水平<0.1 EU/mL，符合GMP标准。

氯膦酸盐脂质体作用机制：

吞噬与释放：脂质体被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体磷酸酶作用下，包裹在脂质体内的氯膦酸盐被逐步释放并在细胞内积累。

诱导Apoptosis ：当氯膦酸盐在细胞内达到一定浓度时，会代谢成不可水解的ATP类似物，抑制线粒体中的ADP/ATP转运机制，从而阻断线粒体呼吸链，诱导巨噬细胞Apoptosis 。

氯磷酸盐脂质体被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体的作用下释放出氯磷酸盐，氯磷酸盐累积到一定量会对细胞产生不可逆性损伤，导致巨噬细胞Apoptosis 。从下图中可以看出，巨噬细胞J774A.1清除一半时的有效药物浓度对正常细胞HUVEC几乎没有损伤。两种细胞对药物的敏感程度相差在10个数量级。