过氧化氢（H2O2）作为活性氧（ROS）的核心成员，既是细胞信号转导的关键分子，也是氧化应激的重要标志物。传统H2O2检测方法（如钛盐比色法、电化学法）存在操作复杂、灵敏度低或需特殊仪器等局限性。西安瑞禧生物推出的H2O2超快检测试剂盒，通过创新氧化显色反应体系与增敏技术，实现了10秒内完成检测、0.02~40 μM宽量程覆盖、细胞兼容安全的突破性性能，为H2O2相关研究提供了高效、准确的工具。

一、技术原理与核心优势

1.氧化显色反应与增敏机制

反应原理：试剂盒基于H2O2与显色底物（如3,3',5,5'-四甲基联苯胺，TMB）的氧化反应，生成红色或荧光产物。通过添加专有增敏剂（如金属离子配合物或纳米催化剂），加速反应速率（10秒内达平台期）并增强信号强度（灵敏度提升10倍以上）。

比色法/荧光法双模式：

比色法：利用红色产物的吸光度（570 nm）与H2O2浓度线性相关，适配分光光度计或便携式比色仪，适用于现场快速筛查。

荧光法：通过荧光底物氧化生成强荧光产物（激发/发射波长560/590 nm），灵敏度更高，适配荧光显微镜、流式细胞仪或高通量筛选系统。

2.超快检测与宽量程覆盖

检测速度：从样品加入到信号稳定仅需10秒，无需孵育或离心步骤，满足高通量筛选需求。

灵敏度与线性范围：最低检测限达0.02 μM，可覆盖生理（0.1~10 μM）及病理（10~40 μM）浓度范围，适用于细胞培养液、组织匀浆或生物流体样本。

3.细胞兼容性与安全性

试剂盒成分（如缓冲液、增敏剂）均通过细胞Poison 性测试（CCK-8法），对活细胞无影响，可直接用于细胞内H2O2原位检测或酶促反应体系。

二、试剂盒组成与操作流程

1.试剂盒组件

显色底物溶液：预配制TMB或Amplex Red溶液，含稳定剂。

H2O2氧化酶（可选）：如辣根过氧化物酶（HRP），用于增强酶促反应信号。

增敏剂溶液：含金属离子或纳米催化剂，加速氧化显色。

终止液（可选）：用于比色法终止反应，稳定吸光度值。

标准品：含已知浓度H2O2的校准曲线溶液（0、0.02、0.2、2、20、40 μM）。

2.操作流程（以比色法为例）

步骤1：向96孔板中加入20 μL样本（或标准品）。

步骤2：加入80 μL显色底物溶液+10 μL增敏剂溶液，快速混匀。

步骤3：10秒后用酶标仪读取570 nm吸光度值，或直接目视观察颜色变化（红色深浅与H2O2浓度正相关）。

步骤4：根据标准曲线计算样本中H2O2浓度。

三、应用领域与研究价值

1. H2O2原位检测

细胞内H2O2动态监测：

结合激光共聚焦显微镜，通过荧光探针（如Amplex Red）实时观察活细胞中H2O2生成与清除过程，解析氧化应激信号通路（如NADPH氧化酶激活）。

适用于药物诱导的ROS生成研究（如Chemotherapy 药物、光敏剂）。

组织H2O2成像：

将试剂盒与组织切片结合，通过比色法或荧光法定位Inflammation或tumor微环境中的H2O2分布，辅助病理诊断。

2. 酶促反应动力学研究

氧化酶活性测定：

通过检测H2O2生成速率，评估葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶等氧化酶的活性及动力学参数（Km、Vmax）。

酶抑制剂筛选：

结合高通量筛选系统，快速筛选H2O2生成抑制剂，用于抗氧化药物开发。

3. 抗氧化活性与Inflammation研究

抗氧化剂筛选：

检测不同浓度抗氧化剂（如维生素C、多酚）对H2O2的清除能力，计算IC50值。

Inflammation模型H2O2水平监测：

在LPS诱导的巨噬细胞Inflammation模型中，定量分析促炎（如TNF-α刺激）与抗炎（如NAC处理）过程中H2O2的动态变化，解析Inflammation信号转导机制。

四、技术优势对比

西安瑞禧生物H2O2超快检测试剂盒以“10秒出结果、0.02 μM灵敏度、细胞安全兼容”为核心优势，为生命科学及环境监测领域提供了高效、准确的H2O2检测解决方案。