制备原理：采用薄膜分散法制备阿霉素和抑制剂共载的脂质体(阿抑-Lip)，并通过后插入法在脂质体表面修饰CTCA单抗，制备出共载阿、抑和药物CAS :1173097-76-1的脂质体(阿抑药酶-Lip)。

制备方法：

称取适量的蛋黄卵磷脂、胆固醇和JO1，加入乙醇中溶解，转移至圆底烧瓶中,40℃旋转蒸发30min,形成一薄膜。用适量超纯水溶解Oxa,60 ℃水化30min。分别过0.22μm滤头三次,脂质体挤出仪五次,制得JO-Lip。将DSPE-PEG2000-pep-药物加入脂质体中，在59℃下搅拌4h，分别过0.22mm滤头三次，脂质体挤出仪五次，得到复合制剂-Lip。照上述方法制备不加任何药物的空白制剂(Blank-Lip)。

西安瑞禧生物确定脂质体的最优处方（常规合成的方法确定脂质体最优处方比例，提供参考文献依据）。阿霉素和抑制剂的药物比例选择（1:0.6）。利用薄膜分散法包载阿霉素和抑制剂,制备双载脂质体（阿抑-Lip),再通过后插入法将DSPE-PEG-pep-CY5.5插入到脂质体表面，制备MMP-2酶响应型脂质体(JOT-Lip)。对其粒径、形态、酶敏感性、载药量、体外释放行为等进行评价。

具体合成步骤

1.准备原料：DOX，抑制剂，蛋黄卵磷脂，胆固醇，MMP2敏感肽，DSPE-PEG2000-NH2，有机试剂，超纯水等。

2.合成功能材料DSPE-PEG2000-pep（PVGLIG）-MAl和DSPE-PEG2000-pep-CTLA mAb分子框架图。（单抗CTLA换成药物CAS :1173097-76-1，做成DSPE-PEG2000-pep-药物）。

3.使用透析方法纯化产物，并通过1H核磁共振（1HMR）证实。

4.通过1H NMR和傅立叶变换红外光谱证实了DSPE-PEG2000-pep-药物的结构。以上的研究证实DSPE-PEG2000-pep-Mal和DSPE-PEG2000-pep-药物成功合成。

检测要求

1.准备三个成品，各50mg

组一、阿霉素和抑制剂共载的脂质体（阿抑-Lip），阿霉素和抑制剂的药物比例选择（1:0.6）

组二、不加任何药物的空白脂质体（空白制剂(Blank-Lip)）

组三、共载阿、抑和药物CAS :1173097-76-1的酶响应脂质体（阿抑药酶-Lip），阿霉素和抑制剂的药物比例选择（1:0.6）

2.粒径分布，三组

取适量的各组制剂，通过粒径电位仪对它们的平均粒径以及PDI进行测定。

3.TEM，三组

采用透射电镜法，考察各组制剂的形态。将制剂滴加至铜网上，再滴加适量2.0%磷钨酸，于红外灯下干燥，利用透射电镜拍照。

4.XRD，组三的检测

取适量阿霉素,抑制剂JQ1,各辅料混合物,以及阿抑抗酶-Lip（DGC Lip）,进行X射线衍射(XRD)考察。

5.包封率和载药量，三组都做检测，组三制备三批测三次

三批重现性考察，按照最优处方，制备三批阿抑抗药-Lip（DGC Lip），测定三批的包封率与载药量，对其进行三批重现性考察。

6.HPLC检测，JOT-Lip体外酶敏感性考察，组三的检测

采用MMP-2敏感肽降解实验，考察阿抑抗药-Lip（DGC Lip）的酶敏感性。配制MMP-2敏感肽溶液和不同浓度的IV型胶原酶(主要成分为MMP-2酶)溶液，得到0，1，5，10，50μg/mL 一系列不同酶浓度的样品溶液，以确定能使MMP-2敏感肽全部降解的最低酶浓度。通过设置0，5，15，30，60min不同孵育时间，以确定能使MMP-2敏感肽全部降解的最短时间。HPLC 进样检测并记录色谱图。

7.阿抑药-Lip药物释放检测，两组包药脂质体的检测

用PH7.4、PH5.0情况下的释药曲线

0，1，2，4，8，10，24，32，48h

测两组载药脂质体中阿霉素的释放情况

测两组载药脂质体中抑制剂的释放情况

8.阿抑药酶-Lip稳定性考察，组三的检测

通过粒径仪测定
复合制剂-Lip在10天内的粒径和 PDI，考察制剂的稳定性