FITC-PEG-FA 绿色荧光素-聚乙二醇-叶酸的分步合成步骤

2025-06-19 作者：ws 来源：

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产品介绍：

FITC（异硫氰酸荧光素）：绿色荧光探针（激发/发射波长～495/520 nm），用于光学成像和细胞追踪。

PEG（聚乙二醇）：柔性亲水链，常见分子量为 2000-10000 Da，可降低免疫原性、延长血液循环时间。

FA（叶酸）：维生素 B9 衍生物，可与叶酸受体（FR）高表达的细胞（如卵巢cancer、乳腺cancer细胞）特异性结合，实现主动靶向。

分步合成步骤

步骤 1：FITC 修饰 PEG（以 NH₂-PEG-COOH 为例）

反应条件：将 FITC 溶于 DMSO，加入 NH₂-PEG-COOH，在 NaHCO₃缓冲液（pH 8.5）中室温避光反应 12-24 小时。

原理：FITC 的异硫氰酸酯基（-NCS）与 PEG 氨基（-NH₂）反应生成硫脲键，得到 FITC-PEG-COOH。

步骤 2：FA 与 PEG 的偶联

FA 的活化：将 FA 与 NHS 和 EDC 在 DMF 中混合，室温反应 4 小时，生成 FA-NHS 活性酯。

偶联反应：将 FA-NHS 加入 FITC-PEG-COOH 溶液中，添加 TEA 调节 pH 至 8.0，室温反应 8-12 小时。

原理：FA-NHS 的活性酯与 PEG 末端羧基（-COOH）反应生成酰胺键，形成 FITC-PEG-FA。

步骤 3：纯化与表征

纯化方法：

透析（截留分子量 3500 Da）：用去离子水透析 48 小时，去除未反应的 FA 和小分子杂质；

反相 HPLC：进一步纯化，收集目标峰（检测波长 280 nm 和 495 nm）。

表征手段：

UV-Vis 光谱：检测 FITC（495 nm）和 FA（280 nm）的特征吸收峰，计算偶联比例；

荧光光谱：验证 FITC 的荧光活性（激发 495 nm，发射 520 nm）；

核磁共振（¹H-NMR）：分析 FA 的芳香环质子信号（δ 6.5-8.5 ppm）及 PEG 的亚甲基峰（δ 3.6 ppm）。

关键注意事项

避光操作：FITC 对光敏感，整个合成过程需避光，产物储存于-20℃避光环境。

FA 的溶解性：叶酸在水中溶解度低，需用 DMF 或 DMSO 溶解，并在弱碱性条件下反应。

PEG 分子量选择：较大分子量（如 5000 Da）的 PEG 可增强循环稳定性，但可能降低 FA 的靶向效率，需权衡。

名称：FITC-PEG-FA

产品规格：mg/g
纯度：95%+

保存方式：-20℃以下，避光，防潮

保质期限：12个月

用途：科研
温馨提示：仅用于科研,不能用于人体

图：叶酸

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