Cy5-Gly（花菁 5 标记甘氨酸）凭借光学特性与生物相容性，在蛋白质标记与成像领域展现出优势。其分子结构中，Cy5 作为近红外荧光染料，具备荧光量子产率高、光稳定性强及组织穿透深度大的特点；甘氨酸（Gly）则为连接蛋白质提供了灵活的活性位点，可通过酰胺键等共价作用实现与目标蛋白的特异性结合。

图为：Cy5-Gly结构式

在蛋白质标记技术方面，Cy5-Gly 主要通过两种策略实现准确偶联。一是利用甘氨酸的羧基与蛋白质的氨基在偶联剂（如 EDC/NHS）介导下发生酰胺化反应，该方法适用于多数含游离氨基的蛋白质，标记效率可达 70% 以上。二是针对含巯基的蛋白质，可通过对 Cy5-Gly 进行马来酰亚胺修饰，使其与巯基形成稳定硫醚键，这种位点特异性标记能减少对蛋白质活性的影响，尤其适用于酶类等功能蛋白的标记。标记反应通常在 pH 7.2-8.0 的缓冲体系中进行，37℃孵育 2-4 小时即可完成，后续通过超滤或凝胶层析可分离纯化标记产物。

成像技术层面，Cy5-Gly 标记的蛋白质可适配多种荧光成像平台。在共聚焦激光扫描显微镜下，其近红外荧光信号能有效规避生物自发荧光干扰，实现亚细胞水平的蛋白质定位观察，例如追踪膜蛋白在细胞迁移过程中的动态分布。在活体成像中，Cy5 的近红外特性可穿透 1-2cm 的组织深度，借助小动物成像系统能实时监测标记蛋白在小鼠体内的代谢路径，如抗体药物偶联物的tumor靶向富集过程。

图为：Cy5结构式

该技术的优势在多方面得到体现：标记后的蛋白质保留了 90% 以上的生物活性，解决了传统荧光标记导致的蛋白失活问题；Cy5 的抗光漂白能力使其可支持长达 8 小时的动态成像，满足长时间观察需求；近红外荧光的低背景特性提升了成像信噪比，检测灵敏度较可见光染料提高 1-2 个数量级。

目前，基于 Cy5-Gly 的技术已应用于蛋白质相互作用研究、细胞信号通路追踪及疾病标志物检测等领域。未来通过与超分辨成像技术结合，有望实现纳米尺度的蛋白质动态可视化，为生命科学研究提供更强大的工具。