文献:New FH peptide-modified ultrasonic nanobubbles for delivery of doxorubicin to cancer-associated fibroblasts.
文献链接:https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=1b3a0p703c7000h0qm4b0jf093752756&site=xueshu_se
作者:Lu Guo1, Dandan Shi, Dong Meng , Mengmeng Shang, Xiao Sun, Xiaoying Zhou, Xinxin Liu, Yading Zhao & Jie Li
相关产品:DSPE-PEG-FITC 磷脂-聚乙二醇-荧光素
原文摘要:Aim: To synthesize and evaluate a novel FH peptide-modified ultrasonic nanobubble-loading doxoru bicin (FH-NB-DOX) for specially cancer-associated fibroblasts (CAFs) targeting and eradication.
Materials & methods: The characteristics, cytotoxicity, contrast-enhanced ultrasound imaging (CEUI), targeting ability and specially eradicating CAFs of these NBs were investigated. Results: FH-NB-DOX (about 208 nm) showed a good CEUI, and achieved higher targeting ability due to the conjunction ability of FH peptide to tenascin C protein high-level expressed in CAFs. Under ultrasound irradiation, FH-NB-DOX could delivery more DOX into CAFs, thus exhibited stronger eradication role compared with NB-DOX and free DOX.
Conclusion: These new NBs, which combines the advantages of targeted theranostic agent and CEUI, is expected to be a potential approach for tumor therapy based on CAF targeted.
DSPE-PEG-FITC 是由 1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、聚乙二醇(PEG)链以及异硫氰酸荧光素(FITC)组成。DSPE 赋予分子良好的脂质双分子层亲和性,使其能够轻易地插入细胞膜结构中,有助于提高化合物载体与细胞膜的融合效率,增强化合物的细胞摄取。PEG 链则具有高度的水溶性与生物相容性,可有效减少蛋白质吸附与细胞非特异性结合,延长循环时间,并且能够灵活调节分子的空间位阻与亲水性。FITC 作为一种常用的荧光标记物,能在特定波长的光激发下发出明亮荧光,这为细胞标记、成像以及追踪研究提供了便利,可直观地观察到材料在细胞或生物体内的分布与行为,基于此该文献合成并评价一种新型FH肽修饰的超声纳米气泡装载阿霉素(FH-N-B-DOX),用于成纤维细胞(CAFs)的靶向和根除。制备过程如下:
图:荧光显微镜分析FH-NB在培养后对WPMY-1细胞或CAFs的靶向能力(A & C),而非靶向NB作为对照(B & D)。
DSPE-PEG-FH的合成
保护肽(H-FH(Trt)H(Boc)H(Trt)K(Boc)S(tBu)PALS(tBu)PVGGG-Resin)通过将保护肽的末端氨基与DSPE-PEG-NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)中的羧基酯化而与DSPE-PEG结合。简而言之,将DSPE-PEG-NHS与保护肽和HBTU以3:1:3的摩尔比混合,然后用三乙胺调节pH至8-9。在室温下适度搅拌保持2h,用茚三酮反应监测。用水、1、2-乙二硫醇、三异丙基硅烷和三氟乙酸(1:2:2:95,v/v/v/v)去除树脂肽保护基,用乙醚分离目标材料(DSPE-PEG-羟乙醚)。然后用蒸馏水透析反应混合物(分子量,截止=3500Da)48h。最后,将溶液冻干并在-20◦C下保存。该产品采用基质辅助激光解吸/电离TOF质谱(MALDI-TOF;Bruker道尔顿电子学公司,MA,USA)进行鉴定。
NBs的制备
分别采用DPPC/DSPE-PEG-FITC/DSPE-PEG-FH和DPPC/DSPE-PEG-FITC/DSPE-PEG2000(10:5:2,摩尔比)制备靶向FH-NB和非靶向NB。简单地说,将磷脂、丙二醇、甘油和DOX的固定比例混合物加入到一个试管中,用磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶解。用长细针用C3F8更换管内的空气。将混合物在水浴中完全溶解后,然后使用机械振荡器使试管振荡。用PBS稀释混合物离心后收集下量溶液。
图:倒置光镜下FH纳米气泡(NB)的形态研究
结论:DSPE-PEG-FITC参与合成FH-nb-DOX(约208 nm)表现出良好的CEUI,由于FH肽与CAFs中高水平表达的C蛋白结合,具有较高的靶向能力。在超声照射下,FH-NB-DOX能将更多的DOX传递到CAFs,比NB-DOX和游离DOX具有更强的根除作用。这些新型NBs结合了靶向化合物和CEUI的优势,成为一种基于靶向CAF的潜在tumor应用方法。