RB-NHS 由罗丹明核心结构、聚乙二醇（PEG）链和末端的 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯基团构成。罗丹明提供荧光特性，PEG 链增加水溶性和生物相容性，NHS 酯基团则是活性反应位点，能够与含氨基（-NH₂）或羟基（-OH）的生物分子发生共价反应，形成稳定的连接。

一、基础荧光稳定性特征

1 固有稳定性：RB-NHS 继承了罗丹明 B 的核心荧光结构（呫吨环共轭体系），在避光、中性 pH、常温下，荧光强度可保持稳定数天至数周（溶液状态）。其荧光量子产率较高（约 0.7），初始荧光信号强，即使轻微衰减也易被检测。

2 光漂白抗性：相较于荧光素（FITC）等染料，RB-NHS 的光稳定性更强，但弱于 Cy3、Cy5 等近红外花菁染料。在持续强光（如荧光显微镜汞灯、激光）照射下，会发生光漂白（荧光逐渐减弱），具体速率取决于光照强度和曝光时间：

普通荧光显微镜下（每次曝光 milliseconds 级），可耐受数十至数百次成像；

激光共聚焦显微镜（高强度激光）下，光漂白更快，可能需要通过降低激光功率或缩短曝光时间优化。

二、影响荧光稳定性的关键因素

1. 光照条件

强光与紫外光：罗丹明 B 的呫吨环结构对强光（尤其是紫外光）敏感，持续照射会导致共轭体系断裂，荧光不可逆淬灭。这是导致 RB-NHS 荧光衰减的主要原因。

避光储存：固体状态下避光储存（-20℃），荧光稳定性可保持 1 年以上；溶液状态需现配现用，或分装后避光冷冻（-20℃），避免反复冻融和光照。

2. pH 环境

中性至弱碱性（pH 6-9）：荧光稳定性最佳，此时罗丹明 B 的分子结构（两性离子形式）稳定，荧光强度无明显变化。

强酸（pH <3）或强碱（pH> 10）：

强酸条件下，呫吨环可能质子化，荧光强度下降；

强碱条件下，酯键（NHS 酯）易水解，同时罗丹明结构可能发生脱乙基反应，导致荧光淬灭。

3. 氧化与还原环境

氧化剂：在过氧化氢、高锰酸钾等强氧化剂存在下，罗丹明的共轭结构会被氧化破坏，荧光快速消失。

还原剂：亚硫酸钠、二硫苏糖醇（DTT）等还原剂可将罗丹明还原为无色的 “隐色体”，荧光暂时淬灭，但在氧化条件下可部分恢复。

4. 金属离子与生物基质

重金属离子：Fe³⁺、Cu²⁺、Hg²⁺等金属离子可与 RB-NHS 形成络合物，导致荧光淬灭（静态淬灭），其中 Fe³⁺的影响最明显。

生物样品干扰：在细胞裂解液、血清等复杂基质中，可能因蛋白质吸附、酶解或活性氧（ROS）存在，加速荧光衰减。例如，细胞内的过氧化物酶可能催化罗丹明氧化。

三、提升荧光稳定性的实用策略

优化实验条件：

成像时降低光源强度、缩短曝光时间，或使用抗荧光淬灭剂（如含防氧化剂的封片剂）；

反应体系避免强酸碱、金属离子和还原剂，优先使用中性缓冲液（如 PBS，pH 7.2-7.4）。

合理储存与处理：

固体 RB-NHS：密封于棕色瓶，-20℃避光干燥储存，保质期可达 1-2 年；

溶液状态：现配现用，若需短期保存，可分装为小份（避免反复冻融），-20℃避光储存，有效期 1-2 周。

规避高风险场景：

长期活体成像（数天以上）不推荐使用，因其在体内可能被代谢酶降解；

需长时间连续监测的实验（如实时动态追踪），建议选择光稳定性更强的染料（如 Alexa Fluor 555、Cy3）。

名称：RB-NHS  

Cas：144700-55-0

化学式：C32H34ClN3O5

产品规格：mg/g

纯度：95%+

保存方式：-20℃以下，避光，防潮

保质期限：12个月

用途：科研
温馨提示：仅用于科研,不能用于人体

图：RB-NHS