双点击生物偶联型 甲基四嗪-DBCO的制备方法
瑞禧生物2025-07-29   作者:ZJ   来源:
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产品介绍:

Me-Tetrazine-DBCO 的反应活性体现在两个关键基团。四嗪环与反式环辛烯(TCO)的点击反应速率极快,在 pH 6.0-8.025℃条件下,二级速率常数达 10M⁻¹s⁻¹,30 秒内反应完成率超 90%,且无需催化剂。DBCO 基团与叠氮化物的环加成反应同样高效,在生理 pH 环境中,4 小时转化率可达 95% 以上,反应特异性强,几乎无副产物。

 

制备方法:

 

PEG链引入(点击化学偶联)
以二苯并环辛炔(DBCO)衍生物为起始原料,通过铜催化或无铜应变促进的叠氮-炔环加成反应(SPAAC),将四聚乙二醇(PEG4)链的叠氮端(N-PEG4)与DBCO的炔烃端共价连接。此步骤的关键在于控制反应条件:

溶剂选择:优先使用极性非质子溶剂(如DMFDMSO),以促进叠氮化物与炔烃的溶解及反应;

温度控制:无铜反应通常在25-37℃进行,避免高温导致副反应;

产物纯化:通过硅胶柱层析或制备型HPLC分离未反应的原料,获得纯度>90%DBCO-PEG4中间体。

 

甲基化修饰(四嗪环功能化)
3-甲基-6-4-氨基苯基)-1,2,4,5-四嗪(Me-Tetrazine-NH2)为原料,通过亲核取代反应或酰胺化反应将其引入PEG-DBCO骨架。具体操作包括:

活化羧基:若PEG4链末端为羧基(-COOH),需先用DCC/NHS活化生成NHS酯;

偶联反应:将Me-Tetrazine-NH2与活化后的PEG-DBCO在低温(0-4℃)下反应,避免四嗪环开环降解;

甲基化优化:通过甲基碘(CHI)或甲基磺酸酯(MeSOH)处理,在四嗪环的3位引入甲基,提升其与反式环辛烯(TCO)的反应速率(动力学常数提升2-3倍)。

 

四嗪基团偶联(骨架构建)
采用无铜环加成反应或亲电取代反应,将甲基化四嗪环准确连接至PEG-DBCO的末端。例如:

环加成策略:利用四嗪环的电子缺陷特性,与TCO衍生物发生[4+2]逆电子需求Diels-Alder反应,生成稳定哒嗪环;

亲电取代策略:通过四嗪环的强亲电性,与富电子芳环(如苯胺衍生物)发生取代反应,形成C-N键。
此步骤需严格监控反应pH(中性至弱碱性)以避免四嗪环水解。

 

纯化与表征(质量把控)

纯化技术:采用反相HPLCC18柱,乙腈-水梯度洗脱)去除未反应的小分子杂质,最终产物

 

 

中文名:甲基-四嗪-二苯并环辛炔
英文名:Me-Tetrazine-DBCO
别称:甲基四嗪-DBCO、甲基四嗪二苯并环辛炔
外观:红色固体(纯度95%
溶解度:溶于二氯甲烷、DMFDMSO

纯度:95%+

保存方式:-20℃,避光,防潮

保质期限:12个月

用途:科研

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体

图片:

双点击生物偶联型 甲基四嗪-DBCO 

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