DBCO-PEG-NHS（二苯并环辛炔-聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯）与叠氮化物的反应属于无铜点击化学，凭借高效性和生物相容性，在生物偶联领域应用较广。

该反应通过 DBCO 的环辛炔结构与叠氮基团发生 1,3-偶极环加成反应，生成稳定三唑环。其动力学特性体现在反应速率快，在生理条件下（pH 7.2-7.4、37℃），二级反应速率常数可达 10²-10³ M⁻¹s⁻¹，远超传统偶联反应。

图为：DBCO-PEG-NHS结构式

实验表明，PEG 链长度影响反应动力学。短链（如 PEG 2000）的 DBCO-PEG-NHS 空间位阻小，反应速率比长链（如 PEG 10000）快约 30%。温度升高可加速反应，37℃时速率是 25℃的 2-3 倍，但过高温度（如超过 42℃）会破坏生物分子的空间结构，降低其活性，因此需在反应效率与生物分子稳定性间寻找平衡。

pH 值对反应影响明显，在 pH 6.5-8.0 范围内反应高效，此时 DBCO 环辛炔和叠氮基团均处于稳定的化学状态；当 pH 低于 6.0 时，叠氮基团易质子化，活性下降；pH 高于 8.5 时，DBCO 可能发生水解，导致反应速率明显下降。缓冲液种类也有影响，磷酸盐缓冲液中反应稳定性优于 Tris 缓冲液，因 Tris 分子中的氨基可能与 DBCO 存在微弱相互作用，干扰反应进程。

图为：DBCO结构式

此外，反应物浓度对动力学曲线影响明显。在一定范围内，浓度升高会加快反应达到平衡的速度，但当浓度过高（如 DBCO-PEG-NHS 浓度超过 1 mM）时，可能因分子间聚集产生空间位阻，反而使反应速率增幅放缓。反应的可逆性极低，一旦生成三唑环，在生理条件下几乎不发生解离，这保证了偶联产物的长期稳定性。

该反应动力学优势使其适用于活细胞标记、抗体药物偶联物制备等场景。例如，在活细胞表面叠氮修饰的蛋白标记中，DBCO-PEG-NHS 可在 15 分钟内完成高效偶联，且因反应条件温和，细胞存活率超过 90%，能在低浓度下快速完成偶联，减少对生物样本损伤，为准确生物偶联提供可靠动力学基础。