TPP-PEG-NHS 作为一种功能性偶联试剂，因兼具线粒体靶向性（TPP 基团）、亲水性（PEG 链）和反应活性（NHS 酯），在生物分子修饰领域备受关注。其与氨基生物分子的偶联反应特性，直接影响修饰产物的结构与功能。

图为：TPP-PEG-NHS结构式

该反应的核心机制是 NHS 酯与氨基的亲核取代反应。NHS 酯基团（-COO-NHS）具有高反应活性，可与生物分子（如蛋白质、多肽、抗体）的游离氨基（-NH₂）在温和条件下反应，生成稳定的酰胺键，同时释放 NHS 小分子。这一反应无需苛刻催化剂，在中性至弱碱性缓冲液（pH 7.2-8.5）中即可高效进行，避免了对生物分子活性的破坏。

反应效率受多重因素调控。温度方面，25-37℃为最佳区间，低温会降低反应速率，高温则可能导致生物分子变性；摩尔比例上，TPP-PEG-NHS 过量 1.5-3 倍时，可提升偶联率，减少未修饰生物分子残留；缓冲液类型也至关重要，含氨基的 Tris 缓冲液会与生物分子竞争反应位点，需优先选用 PBS 或 HEPES 缓冲液。

图为：三苯基膦结构式

产物特性表现为良好的稳定性与功能性。通过凝胶电泳或高效液相色谱可验证偶联产物的均一性，修饰后的生物分子保留了 TPP 基团的线粒体靶向能力，PEG 链则降低了其免疫原性与非特异性吸附。体外实验显示，偶联产物在生理条件下储存 72 小时后，酰胺键断裂率低于 5%，表明反应具有良好的化学稳定性。

该偶联反应的特性为生物分子的靶向修饰提供了高效策略，尤其在 mitochondrial 疾病的靶向Treatment 与诊断领域展现出巨大应用潜力。