DOPE-NHS 即二油酰基磷脂酰乙醇胺-N-羟基琥珀酰亚胺酯，英文名为 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(hydroxysuccinimidyl ester)，是一种重要的磷脂衍生物。

磷脂部分：DOPE 由甘油骨架与两个油酰基脂肪酸链以及一个磷酸乙醇胺基团组成。油酰基脂肪酸链含有 18 个碳原子且带有一个双键，使分子具有柔性和流动性，两个油酰基提供疏水性，磷酸乙醇胺基团为亲水性头部基团，使 DOPE 具有两亲性。

NHS 部分：N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS）通过共价键连接到磷脂的磷酸乙醇胺部分，NHS 基团具有较高反应活性，能与生物分子中的氨基等亲核基团发生特异性反应。

一、优化 DOPE-NHS 的反应条件，确保偶联效率

DOPE-NHS 的核心功能是通过 NHS 酯基团与含氨基的生物分子（如蛋白质、多肽、抗体）发生共价偶联，形成 “磷脂-生物分子” 复合物（用于修饰脂质体、细胞膜或载体表面）。反应效率直接影响后续应用效果，需重点调控以下参数：

1 反应 pH 值

NHS 酯与氨基的反应在中性偏碱性条件（pH 7.0-8.5）下效率最高。酸性条件（pH <6.0）会抑制氨基的亲核性，碱性过强（pH> 9.0）则可能导致 NHS 酯水解失活。

建议使用磷酸盐缓冲液（PBS）或 HEPES 缓冲液（避免含氨基的缓冲液，如 Tris，因其会与 NHS 竞争反应），并在反应前调整 pH 至 7.4 左右。

2 反应温度与时间

常温（20-25℃）下反应即可高效进行，通常反应时间为30 分钟至 2 小时（根据偶联物浓度调整）。

低温（4℃）可减少 NHS 酯的水解，适用于需长时间反应的体系，但需延长反应时间（如 4-12 小时）。

避免高温（>37℃），否则可能导致生物分子变性或 NHS 酯快速水解。

3 反应物比例

为确保生物分子充分偶联，DOPE-NHS 应过量（通常 DOPE-NHS 与氨基的摩尔比为 5:1 至 10:1）。

若生物分子需保持活性（如抗体的靶向性），需通过预实验确定最佳比例，避免过量偶联导致活性位点被屏蔽。

4 溶剂选择

DOPE-NHS 溶于有机溶剂（如二氯甲烷、氯仿、DMSO），但需避免直接加入水相反应体系（可能导致沉淀）。

建议先将 DOPE-NHS 溶解于少量无水 DMSO（浓度 > 10 mM），再缓慢滴加到含生物分子的缓冲液中（DMSO 终浓度 < 5%，避免影响生物分子活性）。

5 终止反应与纯化

反应完成后，可加入过量氨基化合物（如甘氨酸、乙醇胺）封闭未反应的 NHS 酯，终止反应。

通过离心、透析或凝胶过滤层析去除游离的 DOPE-NHS 和副产物（如琥珀酰亚胺），避免残留成分干扰细胞培养。

二、优化载体设计，提升与细胞的相互作用

DOPE-NHS 偶联物常用于修饰脂质体、纳米颗粒等载体，以增强其靶向性或细胞穿透性。载体的理化性质需适配细胞培养体系：

1 脂质体 /载体组成优化

与其他磷脂（如 DOPC、胆固醇）混合使用，调节载体的膜流动性和稳定性。例如：

加入胆固醇可增强载体的结构稳定性，减少在细胞培养体系中的聚集；

搭配 DOPE（非双层结构磷脂）可促进载体与细胞膜的融合，提高细胞摄取效率。

控制载体的粒径（通常 50-200 nm），过小易被细胞快速清除，过大可能影响细胞吞噬或导致Poison 性。

2 表面电荷调控

DOPE-NHS 偶联后，载体表面电荷可能因生物分子（如带电荷的多肽）而改变。

对于贴壁细胞，弱阳离子表面（zeta 电位 0 至 + 30 mV）可增强与带负电的细胞膜的静电相互作用，提高摄取效率；但强阳离子可能导致细胞Poison 性，需平衡电荷与兼容性。

3 避免非特异性结合

若需靶向特定细胞（如tumour细胞），可在偶联靶向分子（如抗体）的同时，加入少量PEG 化脂质（如 DSPE-PEG）修饰载体表面，减少与非靶细胞的非特异性结合，提升靶向效率。

名称：DOPE-NHS

CAS号：1010188-79-0

分子式：C50H87N2O13P

产品规格：mg/g

保存方式：-20℃以下，避光，防潮

保质期限：12个月

温馨提示：仅用于科研,不能用于人体

图：DOPE-NHS