产品介绍：

TCO-NHS 由反式环辛烯（TCO）和 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）通过酯化反应生成。TCO 具有高反应活性，能与四嗪等分子发生生物正交反应；NHS 酯是一种常用的活性酯，可与氨基反应形成稳定的酰胺键。

一、NHS 酯与氨基的偶联反应（修饰生物分子）

TCO-NHS 中的 NHS 酯基团可与含游离氨基（-NH₂）的分子（如蛋白质、抗体、多肽、胺修饰的核酸或纳米材料）反应，形成稳定的酰胺键，从而将 TCO 基团引入目标分子。

反应条件：

1 反应介质：

推荐在水性缓冲液中进行（如 PBS、HEPES、Tris-HCl 等），pH 范围为7.0-9.0（最佳 pH 7.5-8.5）。

若目标分子溶于有机溶剂，也可在DMF、DMSO 等极性有机溶剂中反应（需避免醇类溶剂，以防 NHS 酯被醇解）。

2 反应温度：

常温（20-25℃）即可高效反应，反应时间通常为30 分钟至 2 小时；

低温（4℃）可减少蛋白质等生物分子的变性，适合敏感样品，反应时间可延长至4-12 小时。

3 投料比例：

TCO-NHS 过量有助于提高修饰效率，通常摩尔比为TCO-NHS: 含氨基分子 = 5:1 至 20:1（具体比例取决于目标分子的氨基数量和反应效率）。

4 辅助条件：

反应体系需避免含氨基的缓冲液（如甘氨酸缓冲液），以防氨基与 NHS 酯竞争反应；

可加入少量 DMSO（≤20%）助溶 TCO-NHS（因其在纯水中溶解度有限），但需注意 DMSO 对生物分子的潜在影响。

5 终止与纯化：

反应完成后，可通过透析、凝胶过滤层析（如 Sephadex G-25）或超滤去除未反应的 TCO-NHS；

若需快速终止，可加入过量氨基化合物（如甘氨酸）与剩余 NHS 酯反应。

二、TCO 与四嗪的生物正交反应（后续偶联/标记）

当 TCO 通过上述反应修饰到目标分子后，可与含四嗪（Tetrazine）基团的分子发生反电子需求 Diels-Alder 环加成反应（IEDDA 反应），实现快速偶联（如荧光标记、药物连接等）。

反应条件：

1 反应介质：

兼容性极强，可在纯水、缓冲液（PBS、Tris 等）、细胞培养液、甚至活体组织中进行，无需排除水或氧气。

pH 适用范围广（pH 5.0-9.0），生理 pH（7.2-7.4）下反应效率最高。

2 反应温度：

常温（25℃）或生理温度（37℃）即可快速反应，温度升高可加速反应（如 37℃反应速率比 25℃快 1-2 倍）。

3 反应时间：

反应速率极快，通常在几秒至几分钟内完成（具体取决于浓度：10-100 μM 浓度下，半衰期可短至秒级），远快于其他生物正交反应（如叠氮-炔基反应）。

4 投料比例：

通常按1:1 至 1:3（TCO: 四嗪） 投料，过量四嗪可确保 TCO 完全反应。

5 无催化剂与副产物：

无需金属催化剂（如铜离子）或辅助试剂，避免对生物体系的干扰；

反应唯一副产物是氮气（N₂），无Poison 性，不影响生物活性。

名称：TCO-NHS

CAS号 1191901-33-3

分子式 C13H17NO5

产品规格：mg/g

纯度：95%+

保存方式：-20℃以下，避光，防潮

保质期限：12个月

用途：科研
温馨提示：仅用于科研,不能用于人体

图：TCO-NHS