细胞膜荧光探针 DiI、DiD、DiO 和 DiR 的特性差异，涵盖化学结构、光谱性质、荧光颜色、细胞摄取及标记效果、适用场景等多方面内容。通过对比分析，为科研人员在细胞生物学、生物医学等研究领域选用合适的荧光探针提供参考依据，助力提升实验效率与数据准确性。

化学结构异同

这四类探针同属长链烷基取代的吲哚菁染料家族，核心结构均含吲哚菁母核，但取代基与共轭链长度存差异。DiI 具较短共轭体系，化学结构相对简洁；DiD 共轭链稍长，电子离域范围扩展；DiO 基于氧杂菁结构，有独特醚键连接烷基链；DiR 共轭程度最深，长链与多双键组合构建复杂电子云架构。结构差异奠定它们在光谱、溶解性、细胞亲和性等多方面不同表现基础。

光谱性质

1. 激发与发射波长：DiI 激发波长通常在 549nm 左右，发射波长约 565nm，处于橙红色光区，与常见荧光显微镜滤光片适配良好，易被捕捉观测；DiD 激发波长约 644nm，发射波长 665nm，属远红光区，组织穿透性强于 DiI，在厚样本或体内深层组织成像中有优势；DiO 激发波长 484nm，发射波长 501nm，为绿色荧光，与绿色荧光蛋白（GFP）等可区分标记；DiR 激发波长 750nm，发射波长 780nm，发射近红外光，对生物组织散射、吸收抵御出色，极利体内深层、长时间追踪应用。

2. 荧光稳定性：共轭链增长使 DiD、DiR 相较于 DiI、DiO 具更好光稳定性，在长时间光照实验（如延时成像）下，DiD、DiR 荧光衰减慢，信号维持持久，减少因光漂白致的数据误差与实验中断，保障实验连贯性与准确性。