芴甲氧羰基-氨基-丙基-聚乙二醇2000-戊基-琥珀酰亚胺酯的产品使用指南
瑞禧生物2025-06-16   作者:lkr   来源:
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FmocNH-(CH2)3-PEG2000-(CH2)5-COOSu产品介绍:

FmocNH-(CH2)3-PEG2000-(CH2)5-COOSu是一种具有特定化学结构的聚乙二醇衍生物。该化合物由Fmoc保护的氨基、丙基、聚乙二醇2000链、戊基和琥珀酰亚胺酯基团组成。Fmoc保护基团可在温和条件下通过碱性试剂去除,释放游离氨基,便于后续的化学反应。聚乙二醇2000链赋予该化合物良好的水溶性和生物相容性,使其在生物医药领域具有应用前景。琥珀酰亚胺酯基团具有较高的反应活性,可与含有氨基的分子发生偶联反应,形成稳定的酰胺键。因此,该化合物可用于蛋白质、多肽等生物分子的修饰和标记,以及生物材料的表面改性,为生物医药研究和应用提供了有力的工具。

 

FmocNH-(CH2)3-PEG2000-(CH2)5-COOSu产品使用指南:

一、使用前准备

储存与活化

储存条件:-20℃避光干燥保存,避免反复冻融;使用前从冰箱取出,室温平衡 30 分钟(防止冷凝水影响纯度)。

溶解方案:

常用溶剂:DMSO(推荐,溶解度高且对生物分子兼容性好)、DMF、DCM。

浓度建议:10-50 mM(根据反应规模调整,稀溶液需注意 NHS 酯水解问题)。

现配现用:NHS 酯在水溶液中易水解,建议临用前配制有机溶液,或在缓冲液中快速反应。

 

反应体系准备

缓冲液选择:

推荐 pH 7.0-8.5 的磷酸盐缓冲液(PBS)或 HEPES 缓冲液,弱碱性条件可促进氨基与 NHS 酯的反应。

避免强酸性或强碱性环境(pH <6 或> 9),防止 Fmoc 基团提前脱保护或 NHS 酯水解。

反应物浓度:目标分子(含氨基)与 Fmoc-PEG-NHS 的摩尔比建议为 1:5-1:20(根据修饰位点数量调整,过量 NHS 酯可提高修饰效率)。

 

二、核心使用步骤(以蛋白 PEG 化为例)

Fmoc 基团脱保护(可选)

若需保留 Fmoc 保护,可直接进行 NHS 酯偶联;若需释放氨基,按以下步骤脱保护:

溶解:将 Fmoc-PEG-NHS 溶于 DMSO,配制成 10 mM 溶液。

脱保护:加入 10% 哌啶水溶液(体积比 1:1),室温反应 10-15 分钟(避免过长时间导致 PEG 链降解)。

纯化:通过柱层析(如硅胶柱,洗脱剂:DCM/MeOH=9:1)或透析(MWCO 1000 Da)除去 Fmoc 副产物。

 

NHS 酯偶联反应

步骤 1:溶液配制

蛋白溶液:将蛋白溶于 PBS(pH 7.4,0.1 M),浓度 0.1-1 mg/mL,确保无游离氨基淬灭剂(如胺类、叠氮化物)。

活化剂:若反应效率低,可加入 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)促进活化(适用于羧基修饰场景,此处 NHS 酯已活化,通常无需额外添加)。

步骤 2:混合反应

将 Fmoc-PEG-NHS 的 DMSO 溶液缓慢滴入蛋白溶液中,室温避光搅拌 2-4 小时(或 4℃过夜,降低水解速率)。

反应监测:通过 UV-vis 光谱(Fmoc 基团在 268 nm 处有特征吸收)或 SDS-PAGE 检测蛋白分子量变化。

 

反应终止与纯化

终止反应:加入过量 Tris-HCl 缓冲液(pH 8.0,10 mM)或甘氨酸(100 mM)淬灭剩余 NHS 酯。

纯化方法:

小分子修饰:柱层析(凝胶过滤柱,如 Sephadex G-25)分离 PEG 化蛋白与未反应蛋白。

大分子修饰:透析(MWCO 根据蛋白分子量选择,如 3000 Da),用 PBS 或去离子水透析 24 小时,更换 3-4 次缓冲液。

 

中文名称:芴甲氧羰基-氨基-丙基-聚乙二醇2000-戊基-琥珀酰亚胺酯

英文名称:FmocNH-(CH2)3-PEG2000-(CH2)5-COOSu

外观:固体或粉末

纯度:95%+

溶解性:溶于有机溶剂

保存方式:冷藏

保质期限:一年

用途:科研
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体

图片:Fmoc结构式

Fmoc结构式 

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